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凝胶色谱柱的填料是亲水而刚性的
点击次数:5597 发布时间:2017-03-22
   凝胶色谱柱的技术是六十年代初发展起来的一种快速而又简单的分离分析技术,由于设备简单、操作方便,不需要有机溶剂,对高分子物质有很高的分离效果。凝胶色谱法又称分子排阻色谱法。凝胶色谱主要用于高聚物的相对分子质量分级分析以及相对分子质量分布测试。目前已经被生物化学、分子生物学、生物工程学、分子免疫学以及医学等有关领域广泛采用,不但应用于科学实验研究,而且已经大规模地用于工业生产。
  凝胶色谱柱的充填介质化学稳定性好,不易发生由于官能基脱落而导致样品组分洗脱位置变化的现象。尽管如此,由于柱子的反复使用,在长时间使用后,样品组分的洗脱情况还是会发生改变的。其原因与样品中极微量的附吸物在柱中的蓄积有关。特别由于生物样品组分复杂,这种吸附现象时有发生。(非特异性吸附)当观察到这样的现象后,应使用合适的溶剂将蓄积的吸附物质去除,以恢复柱子的性能。
  1、0.1-0.2mol/L NaOH水溶液(ABA-5PW柱不适用)
  测定状态下,用0.1-0.2mol/L的NaOH水溶液通过样品进样阀清洗数次(3-5回)。
  2、20-40% 醋酸水溶液
  与上述NaOH水溶液的清洗方法相同。
  3、在淋洗液中添加水溶性有机溶剂(疏水性吸附物质的去除)
  在淋洗液中添加甲醇、乙腈等水溶性有机溶剂(浓度《20%)进行过柱清洗。(注意盐的析出)
  4、在淋洗液中添加尿素、中性界面活性剂(难溶性蛋白的去除)
  在淋洗液中添加6-8mol/L的尿素或0.2-0.3%的中性界面活性剂(Triton、Tween、Brij等)后进行过柱清洗。但需注意尿素及界面活性剂的柱中残留。
  凝胶色谱柱的填料是亲水而刚性,多孔球型,化学和机械性能都非常优异的聚合物。适用于以凝胶色谱的模式分析分离蛋白质、多肽、多糖、寡糖、DNA、RNA、水溶性的有机聚合物和其他水溶性大分子样品等。凝胶色谱柱的pH适用范围为2~12。可使用含有50%的混合有机溶剂为流动相,使用温度可达80℃(TSK-gel G-DNA-PW 为50℃)。尽管大多数的TSK-GEL PW填料呈微弱的负电性(约5~8μeq/ml),但是对于分析分离非离子、阴离子和大多数的阳离子型样品没有任何影响。因为TSK-GEL PW填料具有非常宽的分离范围,更加线性的校正曲线以及比凝胶色谱柱更加低得多的吸附特性,所以凝胶色谱柱经常用于分离水溶性的合成聚合物。
021-62176111
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