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反相柱与正相柱的主要区别可看明白了!
点击次数:734 发布时间:2019-08-20
   反相柱与正相柱的主要区别可看明白了!
  正相柱和反相柱源于柱上固定相与流动相之间极性的对比。若固定相极性大于流动相,为正相柱,反之,为反相柱。通常为反相柱应用较多。所有色谱均适用,包括纸色谱和薄层。
  现在一般都用反相柱,正相在样品对水敏感等特殊情况下才使用。正相的固定性是极性的,流动相是非极性的,适于分离强极性物质。反相的固定性是非极性的,流动相是极性的,适于分离弱极性物质。
  二者本质上是填料(固定相)的不同,正相色谱柱填料极性强,洗脱顺序由弱到强;反相柱填料极性弱,洗脱顺序由强到弱。
  1.正相柱正相色谱用的固定相通常为硅胶(Silica)以及其他具有极性官能团胺基团,如(NH2,APS)和氰基团(CN,CPS)的键合相填料。
  由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他极性基团极性较强,因此,分离的次序是依据样品中各组分的极性大小,即极性较弱的组份先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低,如正已烷(Hexane),二氯甲烷(Methylene Chloride)等。
  2.反相柱反向色谱用的填料常是以硅胶为基质,表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强,通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分先被冲洗出,而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。
  常用的反向填料有:C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H5(Phenyl)等。色谱的正反相是根据固定相和流动相的相对极性比较而区分的。
  正相色谱用的固定相通常为硅胶,以及其他具有极性官能团,如胺基团和氰基团的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基或其他团的极性较强,因此,分离的次序是依据样品中的各组份的极性大小,即极性强弱的组份先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低,如:正乙烷、二氯甲烷等。反相色谱填料常是以硅胶为基础,表面键合有极性相对较弱的官能团的键合相。反相色谱所使用的流动相极性较强,通常为水,缓冲液与甲醇,已腈等混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强组合先被冲出,而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留。常用的反相填料有C18、C8、C4、C6H5等。
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