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反相色谱柱的使用方法
点击次数:120 发布时间:2020-11-20
反相柱主要是以硅胶为基质,在其表面键合十八烷基官能团(ODS)的非极性填料。也有无定型和球型之分。常用的其他的反相填料还有键合C8、C4、C2、苯基等,其颗粒粒径在3—10μm之间。反相柱固定相稳定,应用广泛,可使用多种溶剂。
 
反相色谱柱的使用方法:
 
1.先用正己烷-乙腈(99:1)以0.5ml/min的流速冲10倍柱体积,再依次以相同的流速相同的用量用氯、异丙醇、甲醇、甲醇-水(50:50)冲柱子;
 
2.以0.5ml/min的流速用30倍柱体积的pH11.0的氢氧化钠(LUNA)水溶液冲柱子(注意pH值切不可超过11.0),立即用水(0.5ml/min的流速,30倍柱体积)冲洗,再换成流动相;
 
3.配制流动相时,应各组分分别量取,比例较小的组分要精密量取,需调pH值时要精密到0.1;
 
4.反相条件下使用时,要特别注意控制pH值范围,pH值越低越有发生水解的危险,流动相中水的比例越高当然也越有发生水解的危险。理想的pH范围在pH3.0-7.0;
 
5.如果要使用的流动相中还含有缓冲盐类,建议在用分析流动相之前,先用不含缓冲盐的同比例流动相过渡,这样可避免缓冲盐在分析柱内的析出。
021-62176111
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