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关于离子排阻色谱柱应用的几个相关问题

发表时间:2022-04-22      点击次数:301
   离子排阻色谱柱根据动态体积原理,用于众多不同的生物大分子的色谱分离。以单分散多孔硅胶为基质,孔道结构经过特殊设计,并在硅胶表面涂覆中性亲水层,将分析物与固定相之间的相互作用降到zui低。广泛地应用于生物制药、医疗和科研领域。
  离子排阻色谱柱多用不锈钢制成,若果使用时柱压不高于70kg/cm2时,也可采用厚壁玻璃或石英管,管内壁要求有很高的光洁度。用于柱填料的装填。空柱各组件均为不锈钢材质,能耐受一般的溶剂作用。但由于含氯化物的溶剂对其有一定的腐蚀性,故使用时要注意,柱及连接管内不能长时间存留此类溶剂,以避免腐蚀。压帽:即色谱柱两端套合于柱管端外壁的塑性圆柱帽,中部有小孔,多为聚四氟乙烯制成,用于固定筛板。
  1.使用一段时间后柱压过高:
  解决方案:首先查看是否HPLC系统原因,排除系统原因后,原因基本是由于实验过程中杂质在柱中的累积。尽量完善操作条件,做完样品后要及时冲洗干净,如缓冲盐的流动相一定要用高比例的水溶液(如,90%)冲洗完全后再用有机相保存。
  2.筛板堵塞与柱头塌陷:
  解决方法:如确定是色谱柱头的过滤筛板被污染,可以将色谱柱反方向用甲醇冲洗至正常压力,或者卸下色谱柱头,小心取下筛板,用5%左右的硝酸溶液超声处理20分钟左右,再用纯水超声20分钟左右,重新装入色谱柱。
  3.色谱柱头的填料被样品污染:
  解决方法:
  如确定色谱柱头的填料被污染,将柱头螺丝卸下,挖出柱内前段被污染的填料,用相同的柱填料重新填入,仔细修复后,重新安装上柱头螺丝。
  4.色谱柱内缓冲液中的盐遇到高浓度的甲醇或其他有机溶剂,形成结晶析出:
  解决方法:
  如确定是盐结晶,用10%的甲醇/水冲洗色谱柱使柱内盐全部溶解,再换高浓度甲醇。

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