SB色谱柱分离过程的核心

　　选择SB色谱柱时,大多数使用者都认为柱间的重现性是方法建立中极为重要的因素.色谱工作者不愿在校准了一具体系统后,又不得不为一新色谱柱再重新建立HPLC方法.一些生产厂能在一定程度上保证柱性能指标的重现性,如色谱柱塔板数(N),特定样品与条件下的选择性,反压(压力降),特定测试溶质的保留值(k).因此,对许多使用者来说,生产产品的厂家的信誉很重要.SB色谱柱价格对一些用户是重要的因素,但上述讨论的其它因素在建立一个普适性强,令人满意的方法时往往更加重要.色谱柱价格在建立和应用普适性强,可靠的HPLC方法的整个费用中,仅占一小部分。

　　通过改变SB色谱柱硅胶基质的官能团,可以变其反相分离的选择性.以其它官能团改性的多孔聚合微粒,如C18,NH2和CN,也可改变固定相的选择性.不过,目前用于聚合物色谱柱的功能团仅有几种.SB色谱柱与硅胶微粒相比,其缺点是柱效低,极易碎裂.用一些流动相/溶质系统,尤其是大k值的组分,不易获得好峰形.杂质往往会聚集于柱床上,zui终以背景干扰流出.因此,石墨碳柱要求用高纯流动相,被吸附的杂质会不可逆地改变色谱柱的性能,所以样品清除布置对延长色谱柱寿命很有用.这种材料的色谱柱仅有短柱,而且比较贵.目前可供选择的孔径还不多.

　　大多数用于SB色谱柱是用一节内壁经高度抛光处理的直不锈钢管,用收缩接头将其与HPLC仪器连接.不锈钢可用于所有有机溶剂与大多数水性缓冲液.然而,含氯的流动相会缓慢地"卤素腐蚀"不锈钢材质(尤其在低p H时),所以使用该流动相时应倍加小心.综合考虑的话,大多数HPLC用不锈钢色谱柱.也有用玻璃,玻璃衬里不锈钢与塑料制作的商品柱,SB色谱柱用于可能与不锈钢发生有害作用的特殊样品.然而,资料中能证明不锈钢柱发生这类问题的很少.这些与不锈钢成分(铁,铬,镍)牢固络合的样品zui有可能产生这类问题.色谱柱内壁的表面积很小,所以发生不良反应的机会不大.

　　多孔烧结物(滤片)封闭色谱柱的两头,固定住填料微粒.一般来说,5μm与3μm的微粒分别用2μm与0.5μm孔径的不锈钢滤片.不锈钢柱发生的问题,通常要追溯到入口不锈钢滤片,SB色谱柱的表面积比可能与样品发生不良反应的色谱柱内壁要大得多.峰形不好与样品回收率低,可能预示滤片出现问题.多孔钛与聚合物滤片的活性弱,可用于对付这类偶尔发生的问题.