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色谱柱使用的一般注意事项

更新时间:2023-08-15      点击次数:283
 
 1. 色谱柱各部分名称


 2. 色谱柱的安装

(1) 安装色谱柱前请先将设备中的流路充分洗净,置换成流动相。另外,请切换阀清洗并置换进样器的流路(进样环)。置换不互溶或溶解性低的溶剂时,先使置换为双方溶剂都能互溶的溶剂,再置换成使用溶剂。
(例1)从氯仿置换成水的时候,先置换为甲醇,再置换成水。
(例2)从高浓度缓冲溶液(或盐的水溶液)置换成水/乙腈的时候,先置换为水,再置换成水/乙腈。
 

注意 色谱柱不能使用的溶剂在流路中残留可能会造成色谱柱的劣化。
注意 流动相组成发生显著变化,可能造成泵、管路中的污垢脱落,可能会造成色谱柱的劣化。
(2) 查看色谱柱身标签,然后将色谱柱连接到设备,使流动相沿流动方向(➡)流动。 使用保护柱时,请依次先连接保护柱,再连接分析柱。
(3) 请一边按住管路一边拧紧色谱柱的末端接头,防止管路和末端接头中产生空隙。空隙会造成样品的扩散,导致色谱峰变宽。
(4) 将流速设置为小于正常流速的一半,然后开始送液。 在升温使用色谱柱时,以低流送液直到达到设定温度,然后逐渐将流速增加到所需流速。
 
警告 请检查溶剂是否泄露。否则可能会造成漏电、腐蚀或化学损坏。
注意 色谱柱连接入设备时,请注意不要使气泡进入色谱柱,否则可能造成色谱柱劣化。
注意 当连接色谱柱或从停止送液的状态开始送液时,以小于正常流速一半的流速送液,压力突然升高可能会使色谱柱劣化。
注意 升温使用色谱柱后,将流速降低至正常流速的一半以下并继续送液,柱温恢复至室温,然后停泵。 否则洗脱液冷却时发生收缩,在色谱柱内形成空隙可能导致色谱柱劣化。

3. 样品配制

(1) 尽量使用流动相溶解和稀释样品。 如果难以溶解在流动相中,请尽量和流动相组成接近。 对于梯度洗脱,建议使用初始流动相配制样品。
(2) 为了防止由于颗粒物(不溶物)的堵塞导致色谱柱变差,劣化或性能变差,请使用滤膜(0.45μm)过滤样品。
(3) 为了保护分析柱,建议使用保护柱。
 

参考 保护柱可保持分析柱的性能,并没有提高分离性能的作用。

4. 流动相配制

(1) 流动相请充分脱气防止有气泡。
(2) 流动相中含有不溶的杂质可能会导致色谱柱性能下降和色谱图噪声,因此请使用滤膜(0.45μm)过滤流动相。
(3) 确认色谱柱的储存溶剂,不互溶或溶解性低的溶剂时,先置换成双方溶都能互溶的溶,再置成使用溶
(4) 置换流动相时,请使用通常流速一半以下的流速送液。
(5) 进行梯度洗脱时,由于流动相组成的变化,色谱柱压力可能会超过梯度洗脱过程中的最大使用压力。 请调整流速和色谱柱温度,以免超出最大使用压力。
 

注意 使用水时,请使用超纯水装置新配制的水或者刚开封的HPLC级蒸馏水。使用有机溶剂时,请使用HPLC级以上的试剂,开封长时间的有机溶剂可能有性质改变、吸湿、污染的问题,请不要使用。
注意 请勿使用已长时间保存的流动相,组成的变化可能导致洗脱行为的变化和色谱柱的劣化。
注意 如果使用腐蚀性较强的盐(例如氯化钠),请在分析后将其洗净,以免盐残留在设备或色谱柱上,设备和色谱柱可能会生锈。
参考 建议使用在线脱气机。
参考 请设置泵的报警压力,以避免超过最大可用压力。

5. 色谱柱清洗方法

流路或者样品中有不溶物质或者吸附性物质残留在色谱柱内,可能会影响色谱柱的洗脱及压力的变化,这种情况清洗色谱柱可能有改善效果。使用保护柱时,请先去除保护柱进行检测,如果效果改善了,则可能是保护柱的原因,请清洗保护柱。
如果去除了保护柱仍然没有改善,请分别清洗保护柱和分析柱,请注意把保护柱和分析柱分开清洗。清洗色谱柱时,请不要连接检测器,流动相从色谱柱流出后直接流入废液缸即可。

(1) 如果不溶物堵在色谱柱入口,可以逆接色谱柱并以小于正常流速一半的流速通流动相来将其除去。
(2) 其他的清洗方法请参考各产品的使用说明书。
 
6. 色谱柱的保存

置换成出厂时的储存溶剂,从装置中卸下色谱柱并拧紧两端堵头,在温度变化小的阴暗处储存。
 

注意 色谱柱内绝对不能干燥,否则可能导致色谱柱劣化。

7. 色谱柱的检定方法

检定条件请参考各产品包装盒中的出厂报告(Certificate of Analysis)。理论塔板数(N)和不对称系数(Fas)请通过如下方法计算。
 


 
8. 色谱柱的废弃方法

通常实验中使用的色谱柱应根据当地政府的规定,作为工业废弃物进行处置。
 
9. 其它注意事项

(1) 请勿拧开色谱柱的末端螺丝。
(2) 请勿对色谱柱施加敲击,掉落等强烈冲击。

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