使用技巧 | Shodex色谱柱20个常见使用问题

1. 使用前的准备工作

色谱柱使用前，请先下载并仔细阅读产品说明书，了解色谱柱的安全范围，包括可用的流动相、样品、柱压、流速、温度与pH等要求。请注意，一旦超出色谱柱使用范围，色谱柱将发生不可逆损伤！

2. 色谱柱上机前

在色谱柱连接到仪器之前，请务必将整个仪器管路以及进样器清洗干净，并置换为色谱柱可用的流动相。如果设备未经清洗就连接色谱柱并通液，系统中的残留杂质很有可能流入并造成色谱柱污染，甚至损坏色谱柱！

3. 使用什么流动相？

请严格遵守说明书的流动相使用范围。

4. 流动相用什么级别的试剂配制？

请选用色谱纯或更高级别的试剂。若使用分析纯等低于色谱纯级别的试剂，可能出现鬼峰，甚至污染色谱柱。

5. 色谱柱是否需要活化？

Shodex色谱柱无需特殊活化，色谱柱经流动相充分平衡后即可进样。

6. 如何将色谱柱接入仪器？

请将泵调至较低流速，并按照柱身标签方向，将仪器的柱头螺丝与色谱柱入口端连接并拧紧，等色谱柱出口端有液体流出后，再拧上出口的螺丝。

7. 如何调节流速？

请逐步升高或者降低流速，以免流速骤然改变对色谱柱造成损伤。（e.g. 以SC1011色谱柱为例，如果分析流速是1 mL/min，则建议在0.2 mL/min流速下连接柱子入口，流速以0.2→0.4→0.6…梯度升高至使用流速。降速时也按照同样梯度逐渐降低流速）。其他型号色谱柱原理相同，请根据具体使用流速设置梯度。

8. 如何调节温度？

色谱柱的升温和降温均在低流速下进行。（e.g. 以SC1011色谱柱为例，在0.2 mL/min低流速下开启柱温，待温度达到指定温度后，将流速逐步调节至使用流速。分析结束时，千万不能高温停泵！应该先逐步将流速降回至0.2 mL/min，关闭柱温箱加热模块，待色谱柱恢复至室温后，再关闭泵流速）。其他型号色谱柱原理相同，请根据具体使用流速进行设置。

9. 如何计算色谱柱压力？

1) 压力计算

仪器面板或工作站软件显示的压力是设备和色谱柱的总压力。要计算色谱柱的净压力，请在相同条件和流速下卸下色谱柱，使用两通连接管路，并读取设备的空载压力。色谱柱净压力等于总压力减去空载压力。（例如，使用SC1011色谱柱，流动相为H2O，在1 mL/min和80 ℃条件下，设备显示的压力为1.5 MPa。卸下色谱柱后，用两通替换，空载压力为0.5 MPa，则色谱柱净压力为1.5 MPa - 0.5 MPa = 1.0 MPa。其他型号的色谱柱也按此方法计算。）

2) 注意事项

请关注设备的空载压力。如发现异常，请勿连接色谱柱，以免杂质流入并污染色谱柱。

说明书中提供的色谱柱最大耐压是去除设备空载压力后的净压力。

根据色谱柱的最大耐压值，合理设置泵压上限，以防误操作导致超压，损上色谱柱。

10.  如何规范配制柱效测试报告（COA）或实例中的流动相和样品？

- 例1：样品浓度为1 %

称取1 g样品，用溶剂定容到100 mL

- 例2：流动相：H2O/CH3CN=30/70

分别量取30 mL的纯水和70 mL的纯乙腈，将二者混合，即为H2O/CH3CN=30/70

- 例3：样品浓度为5 ppm

1 ppm即一百万分之一浓度（1×10-6），对于液体，1 ppm=1 mg/L

- 例4：1 L的25 mM CH3COONH4 buffer (pH9.2)

1) 先称取1927 mg CH3COONH4，用950 mL的水溶解

2) 缓缓地加入氨水(浓度为25 %)，调节至目标pH值9.2

3) 定容至1000 mL

11. 何时需要衍生，如何衍生？

样品是否需要衍生，取决于其在所用检测器中的响应信号强弱。若响应信号弱，则需进行衍生。

12. 单次分析时间设置多少合适？

由于不同仪器的管路长度各异，且样品在不同分析条件下的出峰时间也不尽相同，因此无法统一确定单次分析时间。建议先尝试进样一次，以摸索合适的设置时间。

13. 色谱柱的使用寿命是多久？

色谱柱是耗材，使用寿命不定，受设备、试剂、样品、操作、使用频率和保存等多种因素影响。请严格按照说明书使用。建议搭配保护柱，并使用高纯度的试剂或药品。流动相建议现配现用，样品在进样前需充分预处理。流动相和样品应过膜后再用，以防杂质堵塞或污染柱头，避免不可逆吸附导致寿命缩短。

14. 常见的损伤色谱柱的原因？

以下操作可能会导致色谱柱产生不可逆的损伤，因此在使用色谱柱之前，请务必仔细阅读色谱柱说明书和本文中的相关注意事项。具体包括：①流速或压力超过色谱柱的限制；②使用了色谱柱无法耐受的溶剂；③在色谱柱高温时直接停泵。

15. 色谱柱使用后、保存前如何冲洗？

正常情况下，先用流动相冲洗至基线平稳，再置换成储存溶剂（置换方法及储存溶剂请参阅说明书）。

若出现柱效下降或压力升高等异常情况，请参考说明书中"色谱柱清洗方法"章节尝试清洗再生。但需注意，并非所有异常情况均可恢复。

16. 色谱柱如何保存？

色谱柱使用结束后，请将其充分冲洗干净，并更换为出厂储存溶剂保存。请勿使用其他试剂长期保存色谱柱，以免造成损坏。如果说明书中没有特别说明，请勿将色谱柱存放在冰箱中。

一般建议将色谱柱保存在阴凉、温差变化小的室温环境中。在存放前，请务必将色谱柱的堵头拧紧，以防柱内液体挥发导致填料干燥。

17. 保护柱与分析柱如何连接？

如无特殊说明，默认使用带端部螺丝的额外管线将保护柱与分析柱连接（如下图所示）。保护柱位于分析柱的上游。请尽量使用短管线，以减少柱外体积扩散对色谱峰形的影响。

18. 如何清洗污染的色谱柱？

在使用色谱柱的过程中，会有样品、流动相和管路中的杂质被吸附，这些杂质会逐渐积累并可能堵塞柱头或与填料结合，从而影响色谱柱的性能。当色谱柱受到污染时，可以参考说明书中的“色谱柱的清洗方法"。

在清洗时，可以将柱子反接，这样可以将堵塞物从柱头冲出。对于保护柱和多个串联的柱子，需将它们拆开并单独清洗。清洗过程中流出的液体应直接导入废液瓶，不要连接到检测器上。

19. 是否可以拆开色谱柱清洗污染的部件？

不可以。色谱柱一旦拆开，端部会形成空隙且无法恢复，空隙造成的柱内扩散会降低柱效，严重影响色谱柱的正常使用。

20. 如何正确测试色谱柱的柱效？

请参照《柱效测试指南》。

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